Synthese und biologische Evaluierung semi-synthetischer Rab7-Proteine

Abstract

In der vorliegenden Arbeit wurden lipidierte, fluoreszenzmarkierte Peptide synthetisiert. Die Peptide entsprechen weitgehend dem C-terminalen Bereich des im intrazellulären Vesikeltransport regulativ wirkenden membrangebundenen Rab7-Proteins. Neben der Teilsequenz, die dem vollständig modifizierten, d.h. im C-terminalen Bereich posttranslational doppelt geranylgeranylierten (C20-Terpenoid) Rab7-Protein analog ist, wurden zusätzlich die zwei potentiellen Teilsequenzen, die den einfach geranylgeranylierten Rab7-Intermediaten aus der posttranslationalen Lipidtransferreaktion analog sind, synthetisiert. In Zusammenarbeit mit der Arbeitsgruppe von Prof. Dr. R. S. Goody vom Max-Planck-Institut in Dortmund konnten Bedingungen zur Verknüpfung lipidierter Peptide mit entsprechend C-terminal verkürzten Proteinen über die Expressed Protein Ligation (T.W. Muir 1998; M.Q. Xu 1998) ausgearbeitet werden, unter denen die synthetisierten Peptide mit verkürztem Rab7-Protein verknüpft wurden. Die resultierenden semi-synthetischen Rab7-Proteine wurden evaluiert und von der Arbeitsgruppe von Prof. Dr. R. S. Goody in biochemischen und biophysikalischen Untersuchungen eingesetzt.

In the present thesis lipidated fluorescently labelled peptides were synthesized. The peptides correspond to a great extend to the C-terminal area of the membrane bound rab7 protein which acts as a regulator in the intracellular vesicle transport. In addition to the partial sequence analogous to the fully modified i.e. in the C-terminal area posttranslationally doubly geranylgeranylated (C20-terpenoid) rab7 protein, the two partial sequences analogous to the potential singly geranylgeranylated rab7 intermediates of the posttranslational lipid transfer reaction were synthesized. In cooperation with the group of Prof. Dr. R. S. Goody of the Max-Planck-Institute in Dortmund conditions for the ligation of lipidated peptides with appropriately C-terminally truncated proteins by use of the expressed protein ligation (T.W. Muir 1998; M.Q. Xu 1998) were elaborated and the synthesized peptides were ligated to C-terminally truncated rab7 protein. The resulting semi-synthetic rab7 proteins were further evaluated and by the group of Prof. Dr. R. S. Goody employed in biochemical and biophysical experiments.