Kinetische und funktionelle Studien am molekularen Chaperon ClpB aus Thermus thermophilus
| dc.contributor.advisor | Goody, Roger S. | de |
| dc.contributor.author | Schlee, Sandra | de |
| dc.contributor.referee | Winter, Roland | de |
| dc.date.accepted | 2003 | |
| dc.date.accessioned | 2004-12-07T08:36:09Z | |
| dc.date.available | 2004-12-07T08:36:09Z | |
| dc.date.created | 2003-07-25 | de |
| dc.date.issued | 2003-07-31 | de |
| dc.description.abstract | Das molekulare Chaperon ClpB aus T. thermophilus gehört zu der AAA+-Familie derATPasen, die konservierte Nukleotidbindungsdomänen enthalten und ringförmige Oligomerebilden. Die Aufgabe von ClpB in der Zelle ist es, in funktioneller Kooperation mit demDnaK-System Proteinaggregate aufzulösen und zu reaktivieren.Ziel dieser Arbeit war es, die Rolle der beiden Nukleotidbindungsdomänen (NBD) von ClpBfür die Chaperonaktivität, Oligomerisierung, Nukleotidbindung und ATPase-Aktivität zucharakterisieren. Wie Gelfiltrationsanalysen zeigen unterliegt ClpB einem dynamischenOligomerisierungsgleichgewicht, welches durch das gebundene Nukleotid und dieIonenstärke beeinflusst wird. Fluoreszenztitrationen mit dem fluoreszierendenNukleotidanalogon mant-ADP belegen, dass die Bindungsaffinität der hochaffinen NBD2stark vom oligomeren Zustand von ClpB abhängig ist. Auch die Analyse der ATPase-Aktivität deutet auf Kooperativität zwischen den beiden NBDs hin. Mit Hilfe von Stopped-Flow-Messungen mit mant-ADP und Fluoreszenzanisotropiemessungen mit AlexamarkiertemClpB wurde ein Bindungsmodell entwickelt, welches die welchselseitigeAbhängigkeit von Oligomerisierung und Nukleotidbindung beschreibt.Studien mit Modellsubstraten Luziferase und a-Glucosidase belegen außerdem, dass ClpBdirekt mit aggregierten Proteinen wechselwirkt. Die Isolation eines spezifischen ClpB-DnaKKomplexesin Ko-Elutionsexperimenten weist darauf hin, dass ClpB und DnaK einenKomplex bilden und in einer konzertierten Aktion auf aggregierte Substratproteine einwirken. | de |
| dc.format.extent | 1872215 bytes | |
| dc.format.mimetype | application/pdf | |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/2003/5562 | |
| dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.17877/DE290R-8056 | |
| dc.language.iso | de | de |
| dc.publisher | Universität Dortmund | de |
| dc.subject | Chaperone | de |
| dc.subject | Kinetik | de |
| dc.subject | Fluoreszenz | de |
| dc.subject | Nukleotidbindung | de |
| dc.subject | Stopped-Flow | de |
| dc.subject.ddc | 540 | de |
| dc.title | Kinetische und funktionelle Studien am molekularen Chaperon ClpB aus Thermus thermophilus | de |
| dc.type | Text | de |
| dc.type.publicationtype | doctoralThesis | de |
| dcterms.accessRights | open access |